产品货号:
ALH603
中文名称:
植物DNA大量提取试剂盒
英文名称:
Plant DNA Rapid Extraction Kit
产品规格:
10T
发货周期:
1~3天
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本试剂盒适用于从大量植物样本中快速提取基因组DNA。改进的经典CTAB植物DNA抽提液内(添加多种针对植物特点的多糖、多酚去除成份)迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,氯仿抽提后通过离心清除多糖、多酚和蛋白质,然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,进一步将多糖、多酚和细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
- 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
- 不需要使用有毒的苯酚等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
- 快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。
- 数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9,长度可达30kb~50kb,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应。
组分 | 规格 |
裂解液PL | 100mL |
结合液PQ | 30mL×2 |
抑制物去除液IR | 100mL |
漂洗液WB | 25mL×2 |
洗脱缓冲液EB | 15mL×2 |
吸附柱AC | 10个 |
收集管(50mL) | 10个 |
保存:室温,有效期1年。
- 裂解液PL、结合液PQ或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀,可以在55℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
- 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
- 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到9000×g,可容纳50mL离心管的台式离心机。
- 开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。
- 需要自备氯仿或者氯仿/异戊醇(体积比24:1混合)、无水乙醇和β-巯基乙醇。
- 结合液PQ和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
- 不同来源的植物组织材料中提取DNA的量会有差异,一般100mg新鲜组织典型产量可达3~25μg。
- 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保pH大于7.5,pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
- 第一次使用前请先在漂洗液WB和结合液PQ中加入指定量的无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
- 取所需适量裂解液PL放置在65℃预热,使用前加入β-巯基乙醇到终浓度2%。
- 取适量植物组织(新鲜组织1-2克或干重组织0.3-0.4克)在研钵中加入液氮充
分碾磨成细粉。 - 转移细粉到一个50mL离心管,不要解冻,加10mL 65℃预热的裂解液PL (确认已加入β-巯基乙醇至2%),剧烈涡旋振荡混匀,用大口径枪头轻柔吹打帮助裂解。
- 如果组织裂解困难,可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。
- 65℃水浴30~60分钟,在水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
可选:如果组织干燥或者产量低,可以适当延长水浴时间。如果RNA残留多,可在水浴前加入100μL RNA酶(20mg/mL)。- 如果提取的DNA残留RNA较多导致电泳时候条带拖尾,条带扭曲,背景很高等不正常电泳情况,可以加1% RNA酶(10mg/mL)37℃或者室温放置半小时即可消化RNA,消化完后不需要特殊处理便可用于PCR或者酶切。
若提取的植物组织富含多糖多酚,可以在第4步前用等体积酚/氯仿(1∶1)抽提一遍。 - 小心吸取上清到一个新的50mL离心管,注意不要吸到界面物质。
- 如上清比较浑浊,则需要重复步骤4一遍,直到得到透亮上清。
- 较精确估算上清量,加入1.5倍体积结合液PQ(请先检查是否已加入无水乙醇!)后立刻涡旋,充分混匀。此时可能出现沉淀,但不影响实验结果。
- 将上一步所得混合物(包括可能出现的沉淀)加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)静置2分钟,9000×g离心2分钟,倒掉收集管中的废液(每次最多可加20mL混合物离心,弃废液,再加入剩余的溶液,再次离心)。
- 加入10mL抑制物去除液IR,9000×g离心2分钟,弃废液。
- 加入10mL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),9000×g离心2分钟,弃掉废液。
- 重复操作步骤9一遍。
- 将吸附柱AC放回空收集管中,最高速(最好大于9000×g,如果离心机转速低,需要相应延长离心时间)离心10~15分钟以干燥膜基质残留乙醇,用枪头吸除内圈压环和柱壁之间可能残留的乙醇,室温或者烘箱晾干几分钟。
- 该步骤目的为彻底去除吸附柱中残留乙醇,残留乙醇抑制下游反应并且严重降低洗脱效率,降低DNA产量。如果洗脱产量低,则必须加做步骤12。
- 可选步骤:选择以下两种方法之一干燥柱子:
- 取下柱子放置于真空容器中,密封真空容器,提供真空15分钟;
- 将柱子放置于60~65℃真空干燥箱或烘箱中,放置10~15分钟。
- 取下柱子放置于真空容器中,密封真空容器,提供真空15分钟;
- 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加1.5~2mL洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65~70℃水浴中预热效果更好),室温放置3~5分钟分钟,9000×g离心4~5分钟。如果需要较多量DNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,离心2分钟。
- 洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果预计和需要产量高,可增大洗脱体积,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于1mL,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。
- DNA可以存放在2~8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。
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